[생명과학] PCR ; polymerase chain reaction (중합효소 연쇄 반응)

PCR

 : 클로닝에 필요한 벡터나 숙주세포 없이 유전자의 일부를 짧은 시간에 다량 복제 할 수 있는 방법입니다.

 

재료

 : 복제하고자 하는 DNA, DNA 프라이머 2개, DNA 중합효소(Taq 중합효소), dNTP, 2가 양이온

 

과정

1. 변성(denaturation)

시험관에 재료를 넣고, 95℃에서 30초간 가열시킵니다.

DNA의 이중나선의 염기간 수소결합이 풀리면서 단일가닥이 됩니다.

 

2. 프라이머 부착(annealing)

온도를 65℃로 30초간 낮춥니다.

이때 DNA 프라이머가 DNA 3'말단과 상보적인 결합을 합니다.

 

3. 신장(extention / elongation)

온도를 72℃로 올려서 수 분간 반응시켜줍니다.

DNA 중합효소가 프라이머에 결합하여 DNA 합성이 진행됩니다.

 

 

 

DNA 중합효소

- DNA 중합효소Ⅰ

    : 대장균의 DNA 중합효소로 95℃에서 변성이 일어나 PCR 주기마다 넣어주어야 합니다.

      37℃에서 활성도가 높기 때문에 37℃에서 신장을 진행합니다.

 

- Taq 중합효소

    : 'Thermus aquaticus'라는 박테리아에서 발견하였습니다.

      고온의 유황온천에서 서식하므로 95℃에서 활성도를 유지합니다.

      72℃에서 활성도가 높기 때문에 72℃에서 신장을 진행합니다.