분자생물학3 [생명과학] PCR ; polymerase chain reaction (중합효소 연쇄 반응) PCR : 클로닝에 필요한 벡터나 숙주세포 없이 유전자의 일부를 짧은 시간에 다량 복제 할 수 있는 방법입니다. 재료 : 복제하고자 하는 DNA, DNA 프라이머 2개, DNA 중합효소(Taq 중합효소), dNTP, 2가 양이온 과정 1. 변성(denaturation) 시험관에 재료를 넣고, 95℃에서 30초간 가열시킵니다. DNA의 이중나선의 염기간 수소결합이 풀리면서 단일가닥이 됩니다. 2. 프라이머 부착(annealing) 온도를 65℃로 30초간 낮춥니다. 이때 DNA 프라이머가 DNA 3'말단과 상보적인 결합을 합니다. 3. 신장(extention / elongation) 온도를 72℃로 올려서 수 분간 반응시켜줍니다. DNA 중합효소가 프라이머에 결합하여 DNA 합성이 진행됩니다. DNA 중합.. 2020. 4. 17. [생명과학] RT-PCR(역전사효소 PCR) 코로나19 관련해서 RT-PCR이라는 용어를 많이 들어봤을 것입니다. 코로나19 같은 RNA를 유전체로 가지는 바이러스들을 검출할 때 RT-PCR 기술이 필수적이기 때문입니다. RT-PCR ; Reverse Transcriptase - Polymerase Chain Reaction (역전사효소 - 중합효소 연쇄 반응) 유전자의 RNA 발현 정도를 측정하는데 이용합니다. cDNA(complementary DNA, 상보적 DNA)를 주형으로 이용하여 PCR을 수행합니다. PCR 과 RT-PCR의 차이점은? PCR은 세포나 조직의 DNA를 단순히 증폭하는 것이지만 RT-PCR은 원하는 유전자의 전사체인 RNA에서 cDNA를 만든 후 클로닝 하는데 사용합니다. 과정 1. 원하는 RNA를 역전사 효소(revers.. 2020. 4. 14. [생명과학] cDNA란 무엇인가? 일반적으로 DNA라 부르는 것은 genomic DNA를 말합니다. 그러면 cDNA는 무엇일까요? cDNA 앞에 c는 'complementary'라는 뜻입니다. 해석하자면 '상보적 DNA'라는 뜻인데요. 구체적으로 어떤 DNA를 cDNA라고 부르는지 알아보겠습니다. '센트럴 도그마' 원리에 따르면 DNA가 전사(transcription)되어 mRNA가 만들어지고 이 mRNA를 번역(translation)하면 단백질이 만들어집니다. cDNA는 '센트럴 도그마' 원리를 역행할 때 만들어 집니다. mRNA가 '역전사(reverse transcription)' 되어서 DNA를 만드는 데 이 때 이 DNA를 cDNA라고 부릅니다. 그렇다면 cDNA와 DNA의 차이점은 무엇일까요? 결론부터 말하면 DNA가 cDNA를.. 2020. 4. 7. 이전 1 다음
